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13.給予Ampelopsin 觀察TNF-α誘導大鼠腎小球系膜細胞 (rat kidney mesangial cell)產生發炎反應後基質金屬蛋白酶-9 (Matrix metallopoateinase-9)活性表現
X檔案-13.給予Ampelopsin 觀察TNF-α誘導

13.給予Ampelopsin 觀察TNF-α誘導


所在宿舍:1.林口-庚心樓
主題:5.專題製作
指導老師:鄭靜宜
系所:健康產業科技研究所

04/22Rio-Rad廠商教學製作電泳膠的方法及訣竅 04/22Rio-Rad廠商指導電泳原理及相關設備的操作原理 04/22廠商教學半乾式轉漬裝置的使用方式 04/23學員使用無菌操作台進行細胞培養 04/23老師示範細胞給藥後收集實驗檢體技術 04/23碩班學姐講解pH值測量方式及配置細胞培養用溶液 04/29學生學習架膠與製備明膠酶膠體 04/29將樣品注入膠體內 04/29跑膠實驗即將結束前要準備保鮮盒及後續處裡的泡製溶液 05/27廠商講解儀器基本使用方式,當學生不理解時鄭老師會幫我們解釋 05/27因空間因素分批指導學生,使其了解儀器的操作方式 05/27數據分析,老師指正學生各項數值所代表的內容 05/28學員上台分享實作後的成果 05/28老師重新講解技術原理並討論結果 05/28老師協助學員更加了解並學習解說圖的意義

計畫內容

1. 取得Ampelopsin,預計分析兩種Ampelopsin異構物
2. 學習細胞培養技術及培養相關溶劑配製
3. 學習細胞存活率分析(MTT Assay) 以不同稀釋倍數的Ampelopsin 進行細胞存活率測試,得到適合用在RMC內不致細胞死亡的濃度
4. 學習明膠酶電泳 ( Zymography ) 法 以添加明膠的膠體測試含有MMP-9的檢體,若檢體內含有MMP-9及其家族分子便會呈現在染色的膠體上
5. 學習西方墨點(Western blot)法 利用聚丙烯醯胺凝膠電泳,檢測檢體內蛋白質,膠體上分離之蛋白質轉漬到PVDF 上,給予對應的抗體,經ECL浸泡、冷光顯影觀察細胞中特定蛋白質的表現量。

預期成效:

★執行前質化:
1. 對於實驗技術不了解原理
2. 無法獨立完成濃度劑算
★執行前量化:
1. 無法獨立完成西方墨點法 2. 無法獨立完成明膠酶電泳
3. 無法在短時間內配置好至少七種濃度的Ampelopsin
★執行後質化:
1. 能解釋該實驗之原理、注意要點、更甚者能指導他人完成實驗
2. 能以清晰完整的方式解釋濃度換算、單位改變、公式計算
★執行後量化:
1. 能獨立完成西方墨點法,且運用至少兩種抗體觀察蛋白質表現
2. 能獨立完成六片明膠酶電泳且完成後續步驟
3. 可以在二十分鐘內完成七種濃度的藥品配製

家族活動日期:04/22時間:10:30-15:00

地點:共同實驗室A
講師:鄭靜宜
活動記錄:
請Rio-Rad廠商教學西方墨點法及相關電泳設備的操作方式 包括: 1.電泳膠片的製作方式 2.電泳膠跑膠所使用的Running buffer配製 3.半乾式轉漬機器操作方式 4.CCD照相系統操作方式 5.分析軟體的使用教學

家族活動日期:04/23時間:10:30-15:00

地點:共同實驗室A
講師:鄭靜宜
活動記錄:
學習細胞培養技術及培養相關溶劑配製 1.介紹細胞培養室的使用方式及消毒方法 2.介紹配藥室內天秤、pH meter操作方法及清潔方式 3.學習培養腎小球系膜細胞 4.學習收集檢體方式

家族活動日期:04/29時間:08:30-14:00

地點:共同實驗室A
講師:鄭靜宜
活動記錄:
學習明膠酶電泳 ( Zymography ) 法 1.學習配製膠體方式 2.瞭解明膠酶電泳法的原理與應用方式 3.配製跑膠用溶液 4.操作照膠系統並分析數據結果

家族活動日期:05/27時間:08:30-14:00

地點:共同實驗室A
講師:鄭靜宜
活動記錄:
學習細胞存活率分析(MTT Assay) 1.實驗的操作方法及原理講解 2.學習儀器的操作方式 3.由廠商帶領下,了解儀器的相關功能與數據分析方法 4.學習細胞培養與相關實驗溶液配製方法

家族活動日期:05/28時間:14:00-17:00

地點:共同教室
講師:鄭靜宜
活動記錄:
整個學期的課程完結 學員分享心得與經驗並相互討論

家族心得-成員:劉佳雯

心得內容:
碩班的課程中有相關的題目在執行,藉由這次的家族課程所學的應該是在指導、講解方面,雖然主講的是老師,但私底下要如何與其他成員溝通、講述實驗過程與技術上的操作,亦是一門相當艱難的課程,很高興這次能參與這個魔法家族的課程,讓我在口條上更上一層樓,更能以簡單的、生動的語句介紹給其他學生或學員。 另外在學習的過程中,相互提出問題找出解決方案是我認為相當好的模式,能夠在短時間內找出問題,或是發現新的問題,思考可執行的程度,最後找到能解決的方式或開發新的解決方法,讓學生們自己摸索找答案的方式,是我最喜歡這個家族執行的原因,希望下學期還有機會入選,讓家族成員繼續在這方面探索。

家族心得-成員:莊惠閔

心得內容:
我本身是碩班的學生,但實驗領域上不同,當初想進來這個魔法家族也是因為好奇、想學習的心態,當入選的結果出爐時,我們超開心的!而且在家族中有不同領域的學生,像是碩班生、大學部學生,其中大學部的學生又有營養系跟妝品系的加入,雖然有時操作我有事無法參與,但事後一定都會去補上課、補做實驗,我認為這就是實驗精神,不應該因為缺席某次課程而放棄當日的進度,雖然在學習過程中有些小摩擦,像是多人要同時操作時無法有效執行,或是執行效果較差、無法每個人都親自操作,可是我們家族成員能有效溝通,分散操作時間,讓我們更能有效利用時間完成,這是我最喜歡這個家族的原因。

家族心得-成員:顏君庭

心得內容:
我即將要從大學畢業了,能在畢業前跟碩班學生憶起學習真是件很特別的課程(經驗),在大四期間,學校的課業已不會太繁重,大部分的時間也留給以準備國考為重點,當初要加入時挺猶豫的,不過現在回想,還好我有參與,能跟不同科系的同學一起努力、團結的感覺是我一直喜歡的一個學習環境,在這樣的教學、實作、討論、分享的過程中,我最喜歡結果討論的部分,明明是相同的實驗步驟,為何跟碩班學姐的結果不同,或是呈現尚無法更加漂亮等等的問題,在結果討論中都能一起去找出問題點,老師也會加入討論會,給予我們技術上的提點,讓我收穫頗多,很可惜我已經要畢業才發現這個家族的好處頗多,不然我應該四年都會參加。

家族心得-成員:蔡沛穎

心得內容:
在於下課後、中午時段、無課時間過來研究室操作,老實說剛開始很不習慣,因為平常我喜歡一下課就回宿舍或是跟朋友出去玩,但是漸漸的我喜歡上這樣的學習環境,說不上來,這裡有著許多歡樂的氣氛,雖然操作過程或是結果並不是每次都很順利,有時也會遇到瓶頸,但是大家並不會因為這個因素而嫌棄,反而是會去回推到底是哪個環節出錯,導致結果不佳,而在回溯的過程中,更能發現出,原來因為某項溶液配置時間過久或是使用次數到達某個臨界點後就無法再顯現出最佳的效果,需要被重新配製、更換,雖然家族的期限將至,但是我仍然相當喜歡在空閒時間跑回實驗室與學員們聯絡感情,去外地玩也會想到買些好吃的伴手禮回去,在這裡我交到了不同領域的朋友,並且更加喜歡上課後學習的時間。

家族心得-成員:柯子琪

心得內容:
參與這個家族與我跟過的專題相當的雷同,只是細胞是使用另一株,不過大同小異,在於學習的過程中遇到的瓶頸相對來的少一些,而且在其他學員有問題時我也能夠提點幾句,讓我享受到當小老師的感覺,其實我覺得學習不分長幼,要相互指點才能更上層樓,但不代表我不尊重學姊喔。 雖然有時會犧牲掉下課後跟同學們歡樂時光,有時也得在六日進實驗室工作,曾讓我不爽過,不過現在想想這真是一個不錯的經驗,讓我能夠在大學生活中體會、體驗到碩班生活以及待人相處的模式。

家族心得-成員:劉韋希

心得內容:
碩班生活已經夠忙的了,還來參與這項學生組成的活動時實在是太瘋狂了,不過有我的實驗夥伴在,我也要來相挺一下,而且這篇的主題跟我有相關性,讓我覺得來學習是值得的!雖然得在花費一些下課後的時間整理資料、處理數據等,但是能跟年輕的學弟妹們一起學習是件開心的事。 在課程進行的過程裡,我們也發生過摩擦,向是使用設備後沒有關電源、物品沒歸位、沒正確清洗消毒等等,但經過溝通現在都已經沒有這些問題了,我想這也是這個家族開設後大家都能一起學習的重要課題。

 
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